哈兽研揭示葡萄糖调节蛋白促进狂犬病病毒入侵的机制

近日，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所在狂犬病病毒（RABV）入侵宿主细胞机制的研究中取得重要进展，首次阐明了葡萄糖调节蛋白78（GRP78）通过调控细胞膜表面病毒受体的稳定性促进RABV入侵的机制。相关研究成果发表在《病毒学杂志（Journal of Virology）》上。狂犬病是一种致死率极高的人兽共患病。现有的研究表明，RABV通过其囊膜糖蛋白特异性结合宿主细胞膜上的受体，利用网格蛋白介导的内吞途径入侵宿主细胞。目前已鉴定出nAChR、NCAM、NGFR和mGluR2四种RABV的潜在受体，但这些受体在细胞膜表面稳定表达的调控机制尚不明确。该研究证实，GRP78是RABV感染细胞的关键宿主蛋白。敲低GRP78的表达可显著抑制RABV的内吞过程。使用GRP78单克隆抗体或靶向GRP78的特异性抑制剂（如HA15分子）均能有效阻断RABV感染。机制研究揭示，GRP78并非与RABV囊膜糖蛋白发生直接结合，而是通过其N端第19-50位氨基酸与上述四种RABV潜在受体发生直接相互作用。这种直接的互作使得GRP78与病毒受体-RABV在细胞膜表面形成复合物，稳定了受体在细胞膜上的表达水平，最终促进病毒的内吞。这一发现完善了RABV入侵的分子机制网络，深化了对宿主-病毒相互作用机制的理解，为研发靶向GRP78的抗狂犬病药物提供了重要的理论基础与新靶点。重要人兽共患病与烈性外来病创新团队王翀副研究员和温志远研究员为共同第一作者，步志高研究员和王金良研究员为共同通讯作者。该研究得到了国家自然科学基金（31900149）的资助。

四川农业大学陈舜/程安春团队揭示禽源蚊媒正黄病毒3’UTR 特化RNA二级结构调控病毒的禽宿主适应机制

    2026年8月11日，四川农业大学动物医学院陈舜/程安春团队在期刊Nucleic Acids Research上在线发表了题为“Duplication of specialized cis-acting elements SLI and SLIII in the viral RNA 3'UTR enables mosquito-borne orthoflavivirus adaptation to avian hosts”的研究论文。该研究以禽源黄病毒坦布苏病毒（TMUV）和日本乙型脑炎病毒（JEV）为病原模型揭示了“禽黄病毒3‘UTR Domain-I特化SLI和SLIII结构与CELF2强互作而增强病毒的禽宿主适应性”的分子机制。     蚊媒黄病毒是通过蚊虫吸血传播的病原，在蚊和脊椎动物间传播和流行，蚊是其媒介宿主。其中，部分可利用禽类作为病毒的储存或终末宿主，称为禽蚊媒黄病毒。蚊媒黄病毒3‘非编码区（3’UTR）在调控病毒RNA复制、翻译及应对宿主抗病毒先天免疫等方面发挥重要作用。哺乳动物蚊媒黄病毒（如DENV、ZIKV等）与禽蚊媒黄病毒（如TMUV、JEV、西尼罗河病毒WNV KUNV等）在3’UTR的RNA二级结构上存在着保守性差异，即哺乳动物蚊媒黄病毒仅2个SL结构，而禽蚊媒黄病毒有4个SL结构，但是机理未知。    为了回答禽蚊媒黄病毒为什么需要在进化中获得多余的2个SL这个科学问题，该研究首先锁定TMUV和JEV为研究病原，基于病毒感染性克隆、非感染复制子等分子工具，利用基因敲除、定点突变、RNA-pulldown联用质谱等多种技术，明确了禽蚊媒黄病毒3‘UTR Domain-I的SLI和SLIII结构是病毒适应禽类宿主的关键特化区域，阐明了SLI和SLIII与CELF2互作的分子基础，揭示了其调控病毒适应禽宿主的分子机制。研究结果为理解蚊媒黄病毒的多宿主适应及跨宿主传播提供了新的理论支撑。研究亮点TMUV复制效率取决于3’UTR Domain-Ⅰ内所保留SL元件的结构特征。3’UTR的SLⅡ结构对于禽蚊媒黄病毒在禽、哺乳动物、蚊宿主的体外增殖至关重要。3’UTR特化的SLⅠ和SLⅢ结构是TMUV和JEV在禽类细胞中高效复制的关键，但是对其在哺乳动物细胞中增殖的调控作用不明显。鉴定并阐释RNA结合蛋白CELF2及其与SLⅠ/SLⅢ强结合机制，揭示其以禽宿主特异性的方式促进TMUV和JEV增殖。    TMUV 3‘UTR Domian-Ⅰ包含4个茎环（SL）结构，对SL结构进行连续顺序缺失、SL单保留及外源SL替换发现TMUV的复制效率取决于3’UTR Domain-Ⅰ内所保留SL元件的结构特征（图1）图1 3'UTR Domain-I的SL结构对TMUV复制至关重要（A）TMUV CQW1株 3‘UTR RNA二级结构预测 （B）SL连续顺序缺失突变体的复制曲线 （C）SL单保留突变体的复制曲线 （D）SLII单保留相关突变体的复制曲线    接着，对各个SL结构进行单独缺失并检测其对病毒增殖的影响。结果表明，缺失SLII结构，病毒在禽细胞DEF、哺乳动物细胞BHK-21和蚊细胞C6/36的增殖显著致弱，而缺失SLI和SLIII结构仅致弱重组病毒在DEF细胞的增殖，而不影响重组病毒在BHK-21和C6/36细胞的增殖 （图2）图2 TMUV 3’UTR Domain-I的不同 SL 结构影响病毒的宿主特异性增殖（A）SL单缺突变体构建示意图；（B）SL单缺突变体的复制曲线；（C）SL单缺突变体在BHK-21细胞的增殖曲线；（D）SL单缺突变体在DEF细胞的增殖曲线；（C）SL单缺突变体在C6/36细胞的增殖曲线    由于SLI和SLIII是禽源黄病毒特有的SL结构，研究进一步聚焦于SLI和SLIII结构对病毒宿主特异性的影响。结果表明，SLI和SLIII双缺失不影响重组病毒在BHK-21细胞的增殖，但却显著致弱了重组病毒在DEF细胞的增殖。此外，将KUNV SLI和SLIII结构同源替换到TMUV骨架，研究发现SLI或SLI+SLIII替换，显著致弱了重组病毒在DEF细胞的增殖，但是所有突变体在BHK-21细胞增殖水平无明显变化。最后，利用蚊源JEV毒株为骨架，将其SLI和SLIII替换为鸭源JEV毒株的同源结构，结果发现SLI和/或SLIII结构的替换均显著促进了重组病毒在DEF细胞的增殖，但是却不影响重组病毒在BHK-21上的增殖。以上结果说明，特化的SLI和SLIII结构促进了MBFVs在禽细胞的高效增殖（图3）图3 特化SLI和SLIII结构以宿主特异性的方式促进TMUV和JEV的禽细胞增殖（A）TMUV SLI和/或SLIII缺失突变体的示意图；(B) 突变病毒在BHK-21细胞和DEF细胞的增殖曲线；C）TMUV SLI和/或SLIII嵌合突变体的示意图；(D) 突变病毒在BHK-21细胞和DEF细胞的增殖曲线；（E）JEV SLI和/或SLIII嵌合突变体的示意图；(F) 突变病毒在BHK-21细胞和DEF细胞的增殖曲线    最后，该研究通过RNA-pulldown结合质谱分析，筛选到了SLI/SLIII结构相关的关键宿主蛋白CELF2，通过过表达和敲低模型验证，结果表明CELF2是与SLⅠ/SLⅢ强结合的关键，以禽宿主特异性的方式调控TMUV和JEV高效增殖。（图4）图4 CELF2促进TMUV和JEV在DEF细胞的增殖（A）RNA pulldown示意图；(B) WT与ΔSLI+SLIII RNA 差异结合蛋白示意图；（C）TMUV RNA与CELF2蛋白结合验证；(D) CELF2过表达对TMUV 在DEF细胞增殖的影响；（E）CELF2过表达对TMUV 在BHK-21细胞增殖的影响；(F) CELF2敲低对TMUV 在DEF细胞增殖的影响；（G）CELF2敲低对TMUV 在BHK-21细胞增殖的影响； (H) CELF2敲低对JEV 在DEF细胞增殖的影响；（I）CELF2敲低对JEV 在BHK-21细胞增殖的影响总结    该研究探究了蚊媒黄病毒3’UTR Domain-I特化SL结构在病毒不同宿主细胞增殖的调控作用。发现禽源蚊媒黄病毒特化的SLI和SLIII结构以宿主特异性的方式调控着病毒的禽细胞高效增殖，而CELF2是上述机制的关键蛋白（图5）。图5 3’UTR Domain-I SLI和SLIII与CELF2强互作决定正黄病毒禽宿主特异性增殖    四川农业大学动物医学院程安春教授和陈舜教授为该论文通讯作者，博士研究生毛李、青年教师贺煜博士、青年教师王涛博士为共同第一作者。研究受到四川省自然科学基金项目(青年科学基金A类)（2026NSFSCZY0119）、国家自然科学基金面上项目（32470142、32272976）和青C项目（32302885、32302848）等基金资助。原文链接：https://doi.org/10.1093/nar/gkag791

禽脑脊髓炎病毒在鸡胚适应过程中的进化

摘要  野生型禽脑脊髓炎病毒（AEV）经口服或皮内感染可引起雏鸡出现神经症状，但对青年鸡无致病作用。然而，若该病毒通过在鸡胚中连续传代实现鸡胚适应，经皮内感染后可导致所有日龄鸡只发生禽脑脊髓炎（AE）。近期有报道称，数起蛋鸡青年鸡经皮内接种疫苗后不久发生禽脑脊髓炎的病例。本研究旨在确定是否因疫苗偶然适应鸡胚而导致这些疫情暴发。研究从 2 种疫苗和 1 份田间样品中分离病毒。其中一种疫苗在疫情暴发前曾用于其中一个鸡群。初代传代后，无论接种何种接种物，均未出现鸡胚瘫痪现象，表明疫苗和田间分离株均未发生鸡胚适应。传至第 7 代后，3 个毒株均完全实现鸡胚适应，可引起鸡胚出现典型病变。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）测定的病毒载量在传代过程中保持稳定。疫苗、田间样品及另外 4 株田间分离株的 VP2 基因部分序列几乎完全一致，且与全球已发表的序列高度相似；仅来自未免疫鸡只的序列存在明显差异。全基因组分析鉴定出 2 个单核苷酸多态性（SNP），可区分野生型毒株和鸡胚适应毒株。对 5 株田间分离株以及分离株第 1、3、5 代传代物的脑组织和神经组织进行桑格测序，结果显示，指示鸡胚适应的突变首次在第 5 代出现。关键词：小 RNA 病毒、震颤病毒、毒力、系统发育、嗜性1引言禽脑脊髓炎（AE）由同名病毒（AEV）引起，该病毒是小 RNA 病毒科震颤病毒属的唯一成员。易感雏鸡经垂直或水平途径（口服或皮内）感染后，会出现以震颤、共济失调以及因腿部进行性无力或麻痹导致行走困难为特征的神经症状。若病鸡无法获取饲料和饮水，则可能死亡。产蛋鸡经口服或皮内途径感染后，会出现短暂的产蛋量下降。因此，蛋鸡广泛接种疫苗。种鸡也必须接种疫苗，以传递母源抗体，保护雏鸡在易感期免受感染。疫苗毒株与田间毒株相同，在蛋鸡和种鸡 10 至 16 周龄时，通过口服或翅膀皮内接种。该日龄的鸡只感染后不会出现临床疾病，但会诱导产生持久免疫力。这种免疫力不仅能保护产蛋期母鸡，还能通过母源抗体保护后代。若病毒在鸡胚中传代次数过多（例如疫苗生产过程中），则可能发生鸡胚适应。鸡胚适应的禽脑脊髓炎病毒毒株会变为嗜神经性，丧失经口感染鸡只的能力，但经皮内接种后，可导致所有日龄鸡只出现临床疾病。田间毒株不会引起鸡胚病变，而鸡胚适应毒株会导致鸡胚瘫痪和发育迟缓。近期有报道称，数起 11 至 14 周龄的蛋鸡青年鸡经翅膜刺种疫苗后发生禽脑脊髓炎。这些非典型感染的可能原因包括：所用疫苗传代次数过高从而发生鸡胚适应、鸡只免疫抑制，也有可能是疫苗误进行肌肉注射，导致所有日龄鸡只出现神经症状。本研究旨在探究第一种可能性，即所用疫苗发生鸡胚适应。此外，本研究对野生型和鸡胚适应型禽脑脊髓炎病毒毒株进行测序，以鉴定与鸡胚适应相关的突变。2材料与方法2.1 疫苗与样品  本研究检测了 2 种活疫苗：疫苗 A（英特威公司），该疫苗在疫情暴发前曾用于其中一个鸡群；疫苗 B（梅里亚公司），用于未发生禽脑脊髓炎的青年鸡群。两种疫苗均为禽脑脊髓炎和禽痘二联疫苗，通过翅膜接种。加利福尼亚州的 5 例禽脑脊髓炎病例中采集 6 份脑组织或神经组织样品，标记为田间 A 至田间 E。这些病例包括森蒂埃斯 - 奎等详细报道的 3 起疫情。2.2 禽脑脊髓炎病毒分离株的分离与传代分离疫苗 A 和 B 毒株时，取 50 微升疫苗用 5 毫升含抗生素 / 抗真菌溶液的胰蛋白胨磷酸盐肉汤（TPB）稀释（青霉素 10000 单位 / 毫升、链霉素 10 毫克 / 毫升、两性霉素 B25 微克 / 毫升，100 倍浓缩液）。加入 250 微升氯仿后，混合物在室温下孵育 10 分钟，期间反复混匀，以灭活两种疫苗中含有的禽痘病毒。随后，样品以 100×g 离心 5 分钟，取上层水相用于鸡胚接种。从脑组织样品（田间 A）中分离病毒时，将组织反复冻融 3 次，在塑料袋中机械研磨。取约 1 毫升研磨物用 4 毫升含抗生素 / 抗真菌溶液的胰蛋白胨磷酸盐肉汤稀释，超声处理后，用 45 微米注射器滤器无菌过滤。取 0.1 毫升病毒悬液或胰蛋白胨磷酸盐肉汤，接种于 6 至 7 日龄的无特定病原体鸡胚卵黄囊内。每个组别（疫苗 A、疫苗 B 和田间 A）各接种 25 至 30 枚鸡胚。接种后 24 小时内死亡的鸡胚归为非特异性死亡。24 小时后每日照蛋，检测特异性鸡胚死亡。鸡胚发育至 19 日龄时，打开鸡胚进行检查。观察每枚鸡胚的活动或瘫痪情况，去除附着的卵膜和卵黄囊残留物后单独称重。每个分离株组取 5 至 6 个完整鸡胚头部合并，加入约等量含抗生素 / 抗真菌溶液的胰蛋白胨磷酸盐肉汤，匀浆后超声处理。混合物以 20000×g、4℃离心 10 分钟，去除残渣。上清液经无菌过滤后用于下一代传代，每组共传代 7 次。实验全程设置模拟接种对照组。2.3 组织病理学 所有组别第 7 代的完整鸡胚用 10% 中性福尔马林固定，组织修整后按常规方法处理并包埋于石蜡块中。切片厚度为 5 微米，置于载玻片上，采用标准方法进行苏木精 - 伊红染色，通过光学显微镜观察。2.4 用于病毒载量监测和 VP2 基因部分序列测定的 RNA 制备按照试剂盒说明书，使用 RNEasy 小提试剂盒从组织匀浆和疫苗中提取 RNA。对于感染鸡胚，使用超声处理后的头部匀浆；对于田间样品，使用未用胰蛋白胨磷酸盐肉汤稀释的脑组织或神经组织匀浆。按照试剂盒说明书，使用 Turbo DNA-free 试剂盒对用于病毒载量测定的 RNA 进行脱氧核糖核酸酶处理。2.5 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测病毒载量使用 QuantiNova 探针法逆转录聚合酶链反应试剂盒（凯杰公司）进行禽脑脊髓炎病毒和 β- 肌动蛋白 RNA 的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测。在 10 微升主反应液中，加入 10 皮摩尔的各引物和探针（表 1）、2 微升模板 RNA、0.2 微升酶混合液，再用无核酸酶水补足至总体积 10 微升。扩增程序为：45℃逆转录 10 分钟，95℃预变性 5 分钟，随后 45 个循环（95℃变性 5 秒，60℃退火延伸 1 分钟）。在退火延伸步骤后收集荧光信号。所有样品均进行 3 次重复检测。为测定扩增效率，将样品用无核酸酶水进行 10 倍梯度稀释。对原样品及稀释至 10-4 的样品各进行 3 次重复检测。使用伯乐 CFX 管理器 3.1 软件，采用回归法计算定量循环数（Cq）和扩增效率。根据平均定量循环数及测定的 β- 肌动蛋白扩增效率（E_beta-act）和禽脑脊髓炎病毒扩增效率（E_AEV），按照公式计算禽脑脊髓炎病毒相对 β- 肌动蛋白 RNA 的病毒载量。表1 病毒载量RT-qPCR和测序用靶序列、目标区和引物扩增片段大小及探针2.6 VP2 和 VP3 基因部分序列测定及与已发表序列的比对使用引物 MK AE1 和 MK AE2（通过逆转录聚合酶链反应扩增多聚蛋白基因 VP2 区 619 碱基对片段。使用引物 AEseq_For_3 和 AEseq_Rev_3 扩增多聚蛋白基因 VP3 区 788 碱基对片段。聚合酶链反应产物使用 QIAquick 聚合酶链反应纯化试剂盒纯化，进行正反向测序。选取 VP2 基因 539 碱基对序列，使用 Phylogeny.fr 软件进行系统发育分析，采用默认设置，使用 MUSCLE 软件进行序列比对，PhyML 软件构建系统发育树并计算近似似然分支支持度。所有序列信息见表 2。2.7 全基因组测序尝试对 2 种疫苗、田间分离株 A 的脑组织匀浆及 3 个毒株的第 7 代传代物进行全基因组测序。取 100 微升疫苗或脑组织匀浆，使用 Trizol 试剂提取 RNA，异丙醇沉淀后重悬于 30 微升无核酸酶水中。使用 Turbo DNA-free 试剂盒去除 DNA，随后使用 Terminator 5'- 磷酸依赖性核酸外切酶按照说明书去除核糖体 RNA。加入乙二胺四乙酸至终浓度 5 毫摩尔 / 升终止反应，使用 QIA 病毒 RNA 试剂盒（纯化，不添加载体 RNA，洗脱体积为 30 微升。使用 2100 生物分析仪通过 RNA 微芯片评估核糖体 RNA 污染情况。使用 NEBNext 超高效定向 RNA 文库制备试剂盒制备 6 个互补 DNA 文库，使用 Illumina HiSeq 3000 平台进行 100 碱基对双末端测序。将测序文库与鸡基因组（Galgal-5.0）比对，使用 Tophat 2 软件去除宿主来源的读段。使用 A5 组装流程（科伊尔等，2015）将未比对的读段组装成重叠群，通过 NCBI-BLAST + 软件鉴定与已知病毒基因最相似的病毒重叠群。田间样品仅获得 3 个重叠群，总长度 1272 碱基对。为获取田间分离株 A 的基因组，额外设计 8 对引物，共覆盖 6042 碱基对。结合这些引物及 MK AE1/MK AE2、AEseq_For_3/AEseq_Rev_3 引物对，通过逆转录聚合酶链反应扩增 10 个片段并测序。使用 MacVector 软件将序列与美国毒株序列比对组装。2.8 全基因组分析  使用 Clustal omega 软件将所得序列与美国毒株、范・罗克尔毒株及匈牙利、香港分离株序列进行比对。选取 VP2 基因 222 个氨基酸、完整 VP3 基因（245 个氨基酸）、聚合酶基因（486 个氨基酸）和 ATP 酶基因（326 个氨基酸）的氨基酸序列，使用上述 Phylogeny.fr 软件进行系统发育分析。2.9 统计分析 采用单因素方差分析和邓尼特多重比较检验，比较鸡胚平均体重与对照组鸡胚体重差异。使用 Prism 软件（格拉夫帕德软件公司，美国加利福尼亚州拉霍亚市）进行统计分析。3结果3.1 禽脑脊髓炎病毒毒株的分离与传代  从 2 种疫苗（A 和 B）和 1 份田间样品（田间 A）中分离病毒。疫苗 A 在疫情暴发前曾用于其中一个鸡群，疫苗 B（不同厂家生产）用于未发生禽脑脊髓炎的青年鸡群。初代传代后，无鸡胚出现瘫痪。第 2 代传代后，疫苗接种组出现瘫痪鸡胚；田间分离株 A 首次引起鸡胚瘫痪出现在第 3 代。传至第 7 代后，所有接种任一毒株的鸡胚均出现瘫痪。同时，鸡胚发育至 19 日龄时的平均体重从 22.5-24.2 克降至 15.4-16.7 克。禽脑脊髓炎病毒特异性鸡胚死亡率波动较大，但随传代次数增加逐步升高，从初代的 3.6%-11.1% 升至第 7 代的 17.2%-35.7%（表 3）。模拟接种对照组未出现瘫痪鸡胚，鸡胚平均体重在 20.4 克至 24.5 克之间，可疑死亡率为 3.6%-14.3%。除疫苗第 4 代和田间 A 第 5 代外，其余各代接种鸡胚平均体重均显著低于相应对照组（P表3 7代每代在胚19日龄时的瘫痪率、死亡率及均重，每种病毒接种25-30枚胚任一病毒分离株第 7 代鸡胚的组织病理学病变在脑部最为严重，表现为局灶性出血、软化、水肿、胶质细胞增生、新生血管形成和矿化。病变还包括骨骼肌纤维严重变性坏死、骨骼肌纤维严重萎缩、心肌炎和腺胃炎（图 1）。模拟接种对照组鸡胚未观察到病变。图 1 接种禽脑脊髓炎病毒（AEV）田间分离株或疫苗株的鸡胚适应第 7 代毒株后，鸡胚出现的组织病理学病变。苏木精 - 伊红（HE）染色。A1：脑部局灶性出血、软化与胶质细胞增生 A2：脑部局灶性水肿、胶质细胞增生与新生血管形成 B：骨骼肌纤维严重萎缩 C：骨骼肌肌纤维严重变性、坏死 D：心肌炎 E：腺胃炎对田间分离株 A、疫苗 A 和疫苗 B 第 1、3、5、7 代鸡胚头部进行病毒载量检测。以鸡 β- 肌动蛋白 RNA 为内参，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应测定病毒载量。鸡胚于 6 至 7 日龄接种，19 日龄检测。禽脑脊髓炎病毒实时荧光定量逆转录聚合酶链反应扩增效率（E_AEV）为 1.934，β- 肌动蛋白扩增效率（E_beta-act）为 1.967。测定第 1、3、5、7 代病毒相对 β- 肌动蛋白信使 RNA 的载量。3 种病毒之间及传代过程中病毒载量相近，仅田间样品原始样品病毒载量低于其他样品 1%（图 2）。 图 2 分别接种田间分离株 A、疫苗 A 和疫苗 B 的第 1、3、5、7 代病毒后，鸡胚头部的病毒载量。病毒载量采用 RT-qPCR 法，以鸡 β- 肌动蛋白 RNA 为内参进行相对定量。鸡胚于 6～7 日龄接种，19 日龄取样检测。3.2 VP2 基因部分序列测定及与已发表序列的比对基于核糖核酸序列构建的系统发育树显示，加利福尼亚州所有田间样品、美国毒株、韩国疫情分离株、沙特阿拉伯未知背景分离株，以及 2 种疫苗和田间样品第 7 代传代物序列同源性均超过 99.6%，聚为一簇。2 种疫苗毒株第 7 代传代物与上述序列同源性为 99.4%-99.6%，但与鸡胚适应范・罗克尔毒株及 2 株中国未知背景分离株聚为一簇，这 3 个序列与主簇同源性约为 95%。香港健康鸡、匈牙利腹泻鸡和英国患病雉鸡的分离株序列明显分化，与主簇同源性低至 80%（图 3）。图3 基于VP2 基因539 个碱基序列构建的系统发育树。比例尺代表每个位点的核苷酸替换数；分支支持度大于 0.5 的近似似然值已在图中标注。序列信息及对应的基因登录号详见表 2。3.3 全基因组分析及鸡胚适应后的标记将所得序列（2 种疫苗、田间病毒及其第 7 代传代物）与美国毒株、范・罗克尔毒株及匈牙利、香港分离株序列进行比对。仅发现 2 个单核苷酸多态性（SNP）与鸡胚适应相关。一个位于 VP2 区 1120 位核苷酸，野生型毒株编码谷氨酰胺，鸡胚适应毒株编码精氨酸；另一个位于 VP3 区 1408 位核苷酸，野生型毒株编码苏氨酸，鸡胚适应毒株编码异亮氨酸（图 4）。原始疫苗中，指示鸡胚适应的读段占比低于 1%（疫苗 B 1120 位无相关读段）；相比之下，第 7 代传代物中相关读段占比为 18.1%-99.2%（表 4）。对田间病例及田间分离株 A、疫苗 A 和 B 第 1、3、5 代传代物的脑组织或神经组织进行桑格测序，结果显示，该方法首次在第 5 代检测到指示鸡胚适应的突变（图 4）。 图 4 与鸡胚适应相关的单核苷酸多态性位点。图中高亮标出两个关键位点：左侧为 VP2 基因区第 1120 位，右侧为 VP3 基因区第 1480 位（位点编号参照美国毒株基因组）。氨基酸序列以美国毒株为标准序列，* 代表保守位点。含第二个单核苷酸多态性位点的野外毒株 B 扩增产物信号较弱，测序质量不达标。表 4 本研究中测定的基因组内与鸡胚适应相关单核苷酸多态性（SNP）的碱基读取数基于 VP2 部分氨基酸序列及完整 VP3、聚合酶和 ATP 酶基因氨基酸序列构建的系统发育树结果不一致，整体上香港和匈牙利分离株与其他序列存在明显差异（图 5）。 图 5 基于 VP2 基因 222 个氨基酸、完整 VP3 基因（245 个氨基酸）、聚合酶基因（486 个氨基酸）及 ATP 酶基因（326 个氨基酸）构建的系统发育树。标尺代表每个位点的核苷酸替换数；图中显示大于 0.5 的近似似然分支支持度值。A：VP2；B：VP3；C：聚合酶；D：ATP 酶。4讨论本研究旨在确定近期青年鸡禽脑脊髓炎疫情暴发是否因疫苗意外发生鸡胚适应所致。该报道并非首例描述蛋鸡经口服或翅膜接种疫苗后暴发禽脑脊髓炎的文献，所有这些研究均难以确定根本原因。在疫苗鸡胚适应、青年鸡免疫抑制、接种方式错误三种可能原因中，只有鸡胚适应可事后验证。田间病例未发现免疫抑制迹象。田间分离株及用于问题鸡群的疫苗 A 均未引起鸡胚病变，表明致病分离株和疫苗均未发生鸡胚适应。然而，田间分离株与疫苗的基因组几乎完全一致，这可能提示疫苗引发了临床症状。另一方面，田间分离株与疫苗的高度相似性不能作为确凿证据，因为全球禽脑脊髓炎病毒序列高度保守。尽管已知禽脑脊髓炎病毒无不同血清型，一大群分离株的 VP2 基因片段同源性极高，这一点非常明显。这些序列包括卡尔内克博士提供给马维尔等（1999）的毒株基因组。鉴于卡尔内克博士在研发禽脑脊髓炎疫苗中的作用，目前使用的许多疫苗很可能源自该毒株，这也解释了其与本研究检测的 2 种疫苗高度同源的原因。其他国家疫情相关序列的病例信息尚未发表。然而，考虑到疫苗的广泛使用及疫苗株具有完全毒力的特点，这些病例很可能由疫苗株引起。事实上，仅香港、匈牙利未免疫散养鸡及英国未免疫雉鸡的序列存在差异。将田间分离株及 2 种疫苗病毒在鸡胚中连续传代，仅需 7 代即可完全实现鸡胚适应，远低于巴特菲尔德等报道的 8 至 20 代。这可能与疫苗生产过程中已进行传代有关。第 2 代即出现鸡胚适应的初步迹象，表明疫苗生产商在毒株传代时保留了较小的安全余量。鸡胚脑部和骨骼肌的病变与文献报道一致。据我们所知，此前尚未有关于鸡胚心脏和腺胃病变的报道。田间暴发禽脑脊髓炎的雏鸡也观察到类似病变。鸡胚死亡率略有升高，这并非鸡胚适应禽脑脊髓炎病毒分离株的典型特征。除田间分离株初代传代外，病毒载量在传代过程中几乎保持恒定，这可能是因为田间样品病毒载量同样较低。由于该材料用于接种下一代鸡胚，这也解释了为何田间分离株出现鸡胚适应迹象晚于疫苗毒株。另一方面，病毒载量基本恒定也表明禽脑脊髓炎病毒的鸡胚适应与病毒复制效率无关。已有研究证实，鸡胚适应的禽脑脊髓炎病毒在鸡胚、1 日龄雏鸡和产蛋鸡中发生器官嗜性改变，这似乎是鸡胚适应的唯一机制。结果表明，这种器官嗜性的改变由 VP2 和 VP3 的 2 个点突变引起，这与柯萨奇病毒类似，柯萨奇病毒 VP2 和 VP3 的 2 个点突变会改变病毒的结合特性。要明确证实这 2 个点突变是鸡胚适应的原因，需要在非鸡胚适应分离株中引入该突变，再感染鸡只复制疾病。此外，尚需确定这 2 个突变是否均为器官嗜性改变所必需，还是任一突变即可。全基因组测序显示，疫苗 A 中存在 2 种突变，疫苗 B 中仅检测到第 2 种突变。该突变可能确实不存在，在后续传代中出现是自发突变的结果。然而，更有可能的是该突变含量极低，未被检测到。已有研究表明，并非所有禽脑脊髓炎病毒分离株都能适应鸡胚。显而易见的解释是，这些分离株中不存在相关突变。从应用角度来看，筛选到此类分离株或通过噬斑纯化、反向遗传学获得该分离株，可制备出安全性更高的疫苗。总之，本研究表明，致病禽脑脊髓炎病毒分离株及所用疫苗均未发生鸡胚适应。然而，测序结果提示，疫苗可能因误肌肉注射或青年鸡免疫抑制，导致加利福尼亚州近期疫情暴发。此外，本研究鉴定出指示鸡胚适应的基因标记（VP2 和 VP3 突变）及其发生风险。

口蹄疫紧急防控方案

2026年3月28日，农业农村部公布在甘肃和新疆两地发生2起口蹄疫疫情，由新传入我国的南非1型口蹄疫引起，原来口蹄疫OA二价疫苗或单价疫苗没有保护效果，目前我国尚无南非1型口蹄疫疫苗供应。为此，以农业农村部发布的《口蹄疫防治技术规范》《农业农村部畜牧兽医局关于切实做好南非1型口蹄疫防控工作的通知》为指导原则，制定以下应急防控方案，供相关单位参考使用。一、口蹄疫病毒特征　　（一）血清型　　牛、猪、羊、骆驼、鹿等偶蹄动物易感。口蹄疫病毒（FMDV）有7  个血清型，其中O、A型是当前广泛流行的型，亚洲（Asia）Ⅰ型曾在我国流行，现已少见。南非1、2、3型（SAT1、SAT2、SAT3）和C型为外来型，但南非1已传入我国新疆伊宁县和甘肃武威古浪县。各型之间不能交叉保护。　　（二）抵抗力　　1. 病毒对热敏感，56℃ 30 分钟可灭活，煮沸立即死亡。　　2. 病毒对酸和碱敏感，2% 火碱、10% 石灰乳、0.3% 过氧乙酸可快速杀灭病毒。　　3. 病毒在粪便、皮毛、组织中可存活数天～数周，对干燥、低温抵抗力较强。二、典型症状　　发病急，传播快。高烧至40～41.5℃，精神沉郁，食欲废绝，大量流涎。口腔和蹄部出现水疱。唇、舌、齿龈、颊黏膜出现水疱、糜烂；蹄冠、蹄叉、蹄踵水疱、破溃、跛行、蹄壳脱落；乳房（乳头表面、乳头根部、乳房基部）出现水疱、烂斑、溃疡。三、流行病学特征　　（一）传染源　　发病畜（水疱液、水疱皮、唾液、奶、尿、粪、呼出气体）、带毒畜（潜伏期和恢复期带毒动物）、被污染的肉、内脏、皮毛、水、饲料、垫料、车辆、工具、人员衣物均是传染源。　　（二）主要传播途径　　1. 呼吸道传播。健康动物吸入含病毒气溶胶经呼吸道感染，病毒还可随风远距离传播。　　2. 消化道传播。健康动物采食被病毒污染饲料、饮水，经消化道传播。　　3. 接触传播：直接接触病畜或其污染物。人员、车辆、用具可带毒，跨场机械性传播。　　4. 易感动物：牛、羊、猪、骆驼、鹿等偶蹄动物。四、应急防控要点 　　（一）防止病毒传入措施　　1. 暂停到疫区引种、外购补栏、物质调配等，加强入场人员和车辆消毒、停止不必要的参观交流，升级生物安全防控措施，阻止病毒传入。　　2. 处于高风险区的牛场，应及时关注周边地区疫情发生情况，更加严格遵守生物安全措施；在农业农村部公布可用于针对新发疫情的疫苗后，应进行疫苗紧急接种。具体遵照当地兽医防疫部门的指示执行。　　3. 对近日有从上述两个疫点引牛的养殖场，应加强排查监测。一旦发现疫情，尽快上报当地兽医主管部门。　　（二）按“早、快、严、小”原则控制疫情措施　　1. 一旦发现牛群出现水疱、流涎、高热、跛行牛，应立即隔离，2 小时内上报兽医主管部门。　　2. 全场封锁，停调运、停交易、严控人车进出。　　3. 加强场区消毒和牛舍消毒，每日 1～2 次。　　4. 确诊后，严格按国家规定实行“封锁+扑杀无害化处理 + 紧急免疫+净化消毒”程序，快速灭源。原创声明：本文版权归“国家肉牛牦牛产业技术体系”所有，转载请注明来源！

科学看待角黄素 切勿“谈之色变”

近期，有打假机构通过检测发现多款鸡蛋中角黄素，其中某企业的一款富硒蛋含量高达9.54mg/kg，超出国家饲料添加限量标准8mg/kg等成为热搜。今天就为大家科普一下角黄素。角黄素安全吗 　　角黄素在严格遵守标准剂量的情况下被认为是安全的。它已通过 JECFA（联合国粮农组织/世卫组织食品添加剂联合专家委员会） 和 EFSA（欧洲食品安全局） 的安全性评估。对于普通消费者，通过鸡蛋、三文鱼等食物摄入的微量角黄素通常不足以致病，无需过度恐慌。什么是角黄素 　　角黄素英文名为Canthaxanthin，又称斑蝥黄或斑蝥黄质，是一种天然或合成的类胡萝卜素化合物，广泛存在于自然界，并作为食品添加剂、营养补充剂或动物饲料着色剂使用。　　天然：广泛存在于某些蘑菇、甲壳类动物（如虾、蟹）、鱼类（如野生三文鱼）、藻类以及禽类的蛋、血液和肝脏中。　　合成：工业上可通过化学合成或微生物发酵生产，用于满足食品、化妆品等领域的商业需求。角黄素的用途 　　饲料添加剂：这是其最主要的用途。在水产养殖中，它能赋予养殖三文鱼和鳟鱼亮丽的粉红或红色肉质；在家禽养殖中，它能显著加深蛋黄、皮肤及羽毛的颜色。角黄素能显著加深蛋黄、皮肤及羽毛的颜色　　食品着色剂：作为一种安全的色素（编号为 E 161g），它被用于饮料、糖果、酱料等加工食品中，增加红色色调。　　营养与健康：具有良好的抗氧化性能。此外，在一些国家，它也曾被用于“晒黑丸”（Tanning pills）中，通过在脂肪层积累色素使皮肤呈现棕红色。角黄素的“量”的问题 　　天然角黄素是安全的，但作为添加剂时，各国监管机构（如 EFSA）对其每日允许摄入量（ADI）有限制。　　目前全球多个国家和地区均允许其在食品和饲料中合理使用，具体限量要求如下：　　FAO/WHO（联合国粮农组织/世界卫生组织）明确角黄素在小虾、冷饮等食品中的添加限量为30～200 mg/kg；其联合专家委员会评估确定，角黄素的每日允许摄入量（ADI）为0～0.03 mg/kg体重，该标准基于终身每日摄入不会对健康产生显著风险而定，适用于所有食品途径的总摄入量。　　以 70 kg 成年人为例，每日可安全摄入角黄素最高为 2.1 mg；按检测鸡蛋角黄素含量（10.6 mg/kg）计算，每枚鸡蛋含0.66 mg，吃3枚鸡蛋还没有到2 mg；《中国居民膳食指南》推荐每天每人摄入蛋50 g，相当于0.53 mg角黄素，远远低于2.1 mg的安全限值。　　中国：根据《饲料添加剂安全使用规范》（农业部公告第2625号），角黄素作为着色剂，在蛋禽、肉禽配合饲料中的最高添加限量分别为8 mg/kg和25 mg/kg。　　美国：美国FDA要求，角黄素在食品中的含量不得超过30 mg/456 g（约65.8 mg/kg）。　　欧盟：欧盟各国允许角黄素用于食品和饲料，2008年根据欧洲食品安全局的意见，为动物源性食物中的斑蝥黄质设定了最高残留限量，其中三文鱼肉、鳟鱼肉（湿重）分别为10 mg/kg和5 mg/kg；欧盟食物科学委员会在1997年设定的ADI与FAO/WHO联合专家委员会一致，为0.03 mg/kg体重。食品安全固然重要 但不要“谈之色变” 　　俗话说：“民以食为天，食以安为先”。食品安全无小事，一粒米一桌餐，牵动着千家万户，关乎人民群众的身体健康和生命安全。　　食品安全问题，无论是观点，还是监管，最需要的还是科学和理性。　　食品添加剂是食品安全永远绕不过去的一个话题，有人说：“没有食品添加剂，就没有现在的食品工业。”也有人说：“现在很多的食品问题，都是添加剂惹的祸。”事实上，科学而理性的判断就体现在食品安全国家标准GB2760-2014(2024)中，非必要不添加、最小量使用原则、正当使用原则（不得以食品添加剂掩盖食品本身质量缺陷或以掺杂使假为目的使用）是食品添加剂使用的最高准则。　　然而在现实中，各种评测机构或企业以保护消费者食品安全为幌子，制作各种焦虑、矛盾。作为消费者的我们，需理性的去看待，建议关注产品本身整体安全性。

四川农业大学程安春教授团队在新型鸭呼肠孤（NDRV)核酸纳米颗粒疫苗研发领域取得重要进展

近日，我校程安春教授团队田斌副教授课题组在新型鸭呼肠孤（NDRV)核酸纳米颗粒疫苗研发领域取得重要进展。相关成果以  “Nanovaccine based on Chitosan Oligosaccharide-Polyethyleneimine packaged circRNA Encoding Sigma C Proteins Elicits Protective Immunity against Novel Duck Reovirus in Ducks”为题，在线发表于国际学术期刊《International Journal of Biological Macromolecules》，为新型鸭呼肠孤高效防控供了创新技术方案。鸭新型呼肠孤病毒病（Novel Duck Reovirus Disease, NDRV disease），也称鸭出血性坏死性肝炎，由鸭新型呼肠孤病毒（NDRV）引起，是一种严重威胁全球养鸭业的高致死性传染病。该病毒首次于2011年在北京鸭中被发现，与经典的番鸭呼肠孤病毒相比，其宿主范围更广（可感染野鸭、樱桃谷鸭、北京鸭、番鸭及鹅），且具有更强的致病性和更高的死亡率。目前尚无商品化疫苗可用，而研究中的灭活苗、弱毒苗及亚单位苗等传统平台均存在免疫原性弱、毒力返强或表位覆盖不全等缺陷，难以满足临床防控需求。NDRV 是一种无囊膜双链RNA病毒，其 sigma C (σC) 蛋白是主要的结构蛋白和关键免疫原性蛋白。作为病毒入侵宿主细胞的主要介质，σC蛋白能高效刺激机体产生特异性中和抗体及Th1/Th2型细胞免疫应答，且免疫后抗体水平与攻毒保护效力呈正相关。因此，σC蛋白是研发新型亚单位疫苗或基因工程疫苗的理想靶点。为突破传统疫苗的技术瓶颈，环状RNA（circRNA）疫苗技术为解决NDRV防控难题提供了全新思路。与线性mRNA疫苗相比，circRNA凭借其共价闭合的环状结构，可有效抵抗外切酶降解，在哺乳动物细胞中的半衰期延长5倍以上，实现超过7天的持续抗原表达。其通过内部核糖体进入位点或m6A修饰驱动翻译，且缺乏5'帽结构，从而规避模式识别受体识别，显著降低先天免疫激活。这些优势已在新冠、流感及寨卡病毒等circRNA疫苗研究中得到充分验证。本研究基于T4噬菌体I型内含子自剪接系统，以鸭甲型肝炎病毒1型的内部核糖体进入位点驱动NDRV σC抗原表达，成功构建了circRNA-σC候选疫苗。高效的递送系统是circRNA疫苗发挥效力的关键。壳聚糖作为一种天然阳离子多糖，因具有优异生物相容性和黏膜粘附性，是理想的核酸递送材料。聚乙烯亚胺则凭借高电荷密度介导的“质子海绵”效应，能高效促进内涵体逃逸。二者结合形成的CS-PEI复合物可协同增效：既保留了PEI的高效内涵体逃逸能力，又降低了其细胞毒性。相较于脂质纳米颗粒，该递送系统具有制备简便、成本低廉的优势，在禽用疫苗研发中前景广阔。针对当前鸭新型呼肠孤病毒病防控的迫切需求，田斌副教授团队创新性构建了基于环状RNA技术的NDRV疫苗研发平台。该团队通过构建系列质粒，成功制备了携带报告基因或NDRV σC蛋白的circRNA，并利用CS-PEI纳米递送系统将其封装为直径约170纳米的疫苗颗粒。体外实验证实，circRNA-σC可成功转染HEK293T及鸭胚成纤维细胞，实现外源蛋白的高效表达。研究进一步系统评估了CS-PEI-circRNA-σC疫苗的免疫保护效果。结果显示，该疫苗可诱导雏鸭产生强效的体液与细胞免疫应答，并能完全抵御NDRV强毒攻击，保护率达100%。这一研究为研发新一代禽类病毒病疫苗奠定了重要基础，也为其他病毒性疫病的防控提供了可借鉴的技术方案。 四川农业大学动物医学院副教授田斌为论文第一作者，硕士研究生蔡倩迪和肖镇为并列一作，程安春教授为通讯作者，四川农业大学为第一通讯作者单位。本研究由成都市科学技术局项目（编号：2025-YF05-00721-SN）、国家自然科学基金项目（编号：32473042）、四川省自然科学基金项目（编号：2025ZNSFSC0210）以及四川农业大学自由探索专项基金项目（编号：2024ZYTS011 和 2521993028/2025）共同资助。原文链接：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2026.151095

研究揭示革兰氏阴性菌引发系统性氧化损伤与炎症的共性机制

　　近日，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所家畜营养与调控科技创新团队研究揭示了革兰氏阴性菌致病成分精准攻击宿主线粒体，引发系统性氧化损伤与炎症的共性机制。相关研究成果发表在《氧化还原生物学（Redox Biology）》上。　　在现代家禽养殖中，鸡舍内高浓度粉尘颗粒物（PM）不仅是呼吸道刺激物，更是微生物气溶胶的载体。其中，革兰氏阴性菌释放的外膜蛋白（OMPs）和脂多糖（LPS）是两大关键毒力因子，但长期以来，它们如何协同破坏宿主细胞稳态、诱发氧化应激和炎症，缺乏统一的理论框架。　　本综述创新性地提出“线粒体-活性氧（ROS）轴”作为解释机制的核心模型。研究表明，OMPs可通过破坏宿主细胞铁稳态、靶向线粒体膜通透性，诱导线粒体功能障碍和细胞凋亡，而LPS则主要通过TLR4/MyD88和TRAF6-ECSIT信号通路，触发线粒体产生大量ROS，进而激活NLRP3炎症小体，导致细胞焦亡和系统性炎症。二者虽起始路径不同，但最终汇聚于线粒体，引发ROS爆发，突破宿主的抗氧化防御系统。这一机制模型不仅为解释养殖环境中多种病原成分共同作用的病理过程提供了整合视角，也为开发针对性干预措施—如通过营养调控增强宿主抗氧化能力、改善饲养环境减少病原菌暴露—奠定了理论基础。代丽

中国农科院兰兽研张念章，宋润润等：阿苯达唑治疗囊型棘球蚴病的研究进展

阿苯达唑治疗囊型棘球蚴病的研究进展宋润润1(), 张欢1, 洛桑曲珍2, 次普赤2, 张念章1()    Research Progress of Albendazole in the Treatment of Cystic EchinococcosisSONG Runrun1(), ZHANG Huan1, LUOSANG Quzhen2, CI Puchi2, ZHANG Nianzhang1()    RichHTML8PDF9摘要/Abstract摘要：囊型棘球蚴病（cystic echinococcosis，CE）是由细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus，Eg）的幼虫寄生于人及家畜的肝脏、肺脏等组织所引发的严重的人兽共患寄生虫病。当前主要治疗手段为手术切除囊性病变组织并辅以药物化疗。传统药物甲苯咪唑（mebendazole，MBZ）和阿苯达唑（albendazole，ABZ）仅能抑制Eg的生长和繁殖，无法彻底杀灭虫体，致使患者需长期大剂量服用，易引发肝毒性等显著不良反应。因此，亟需研发更新型、安全、高效的替代疗法。近年来，ABZ新型制剂、新型递送方式及联合用药策略成为研究热点。一方面，新型制剂和递送方式研发聚焦提升ABZ的生物利用度并降低毒性：乳剂、盐制剂通过优化药物溶解性增强疗效；ABZ与脂质体、壳聚糖等纳米颗粒或载体结合，构建靶向递送系统，提升病灶药物浓度，并在一定程度上降低全身毒性。另一方面，联合用药策略展现协同效应：ABZ与吡喹酮、氯芬奴隆和α-干扰素等药物或化合物联用，通过多机制干扰寄生虫代谢，增强杀虫效果。但目前尚未研发出具有突破性的迭代治疗产品。笔者通过综述ABZ在治疗CE方面的研究动态，分析ABZ不同治疗方式的优势与不足，旨在为未来药物研发以及临床治疗方案的优化提供科学、可靠的参考依据。关键词: 囊型棘球蚴病（CE）; 阿苯达唑（ABZ）; 新型制剂; 新型递送方式; 联合用药Abstract:Cystic echinococcosis （CE）， a severe zoonotic parasitic disease caused by the larval stage of Echinococcus granulosus （Eg）， primarily affects human and livestock liver and lung tissues. Current treatment primarily involves surgical removal of cystic lesions combined with chemotherapy. However， traditional medications such as mebendazole（MBZ） and albendazole（ABZ） only inhibit parasite growth and reproduction without complete eradication， requiring long-term high-dose administration which can lead to adverse reactions including hepatotoxicity. Recent research has focused on novel ABZ formulations， delivery systems， and combination therapy strategies. Novel formulations and delivery methods aim to enhance efficacy by improving bioavailability and reducing toxicity： Emulsions and salt preparations optimize drug solubility， while ABZ combined with nanoparticles or carriers （liposomes and chitosan） creates targeted delivery systems that increase local drug concentration while minimizing systemic toxicity. Combination therapies demonstrate synergistic effects through multi-mechanism interference with parasite metabolism， combining ABZ with drugs such as praziquantel， flubendazole， and α-interferon. Despite these advances， no breakthrough therapeutic alternatives have emerged. This review summarizes the research progress of ABZ in treating CE， analyzing the advantages and limitations of various treatment approaches to provide a scientific basis for future drug development and clinical treatment optimization.Key words: cystic echinococcosis（CE）; albendazole（ABZ）; novel formulations; novel delivery methods; combination therapy中图分类号: S859.79+5引用本文宋润润, 张欢, 洛桑曲珍, 次普赤, 张念章. 阿苯达唑治疗囊型棘球蚴病的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2026, 53(2): 555-563.SONG Runrun, ZHANG Huan, LUOSANG Quzhen, CI Puchi, ZHANG Nianzhang. Research Progress of Albendazole in the Treatment of Cystic Echinococcosis[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2026, 53(2): 555-563.使用本文0    /   收藏文章 0 /   推荐导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks链接本文: https://www.zgxmsy.cn/CN/10.16431/j.cnki.1671-7236.2026.02.004               https://www.zgxmsy.cn/CN/Y2026/V53/I2/555原文链接：https://www.zgxmsy.cn/CN/10.16431/j.cnki.1671-7236.2026.02.004?sessionid=

兰州兽医研究所创新团队解析Asia1型疫苗毒株抗原结构特征

近日，中国农业科学院兰州兽医研究所宿主抗病毒感染与免疫生物学创新团队在《PLOS PATHOGENS》期刊发表题为“Porcine B cell receptor repertoire uncovers balanced recognition of antigenic structures on serotype Asia1 foot-and-mouth disease virus”的研究论文。我国曾经发生口蹄疫（FMD）O，A，Asia1三种血清型病毒引起的疫情，通过强制免疫措施，目前仅Asia1型实现非免疫无疫，提示Asia1型具有独特的抗原结构特征。本研究系统解析了Asia1/JS/05疫苗毒株的四个抗原位点，其一位于VP2 B-C环，其关键决定簇为68（D）、72（N）、77（H）位氨基酸；其二为跨越位点2和位点4的新抗原位点，由VP2 73（L）位和VP3 B-B结59位（E）氨基酸组成；其三位于结构蛋白VP1 C-末端，关键氨基酸为206（P）位和209位（Q）；其四为位于VP1 G-H环“RGDL”基序，为跨血清型的广谱中和位点。基于位点靶向性竞争ELISA分析4个位点免疫优势性，证实O/HN/93和A/WH/09疫苗抗原的免疫优势性相对集中于VP1 G-H环；而Asia1/JS/05疫苗抗原诱导的抗体应答均匀分布于VP1 G-H环、VP2 B-C环以及VP3 B-B结。这种免疫优势性均衡分布于VP1、VP2及VP3不同抗原位点的结构特征，可能有效增强了抗体中和效力、并降低了免疫逃逸风险，在分子层面解析Asia1型疫苗的高效保护机制，为未来广谱疫苗设计提供了重要理论依据。该研究得到了国家重点研发计划（2021YFD1800300）、国家自然科学基金（32373028, 32171300, 32072873）、中国农业科学院创新工程（CAAS-CSLPDCP-202402）、中央高校基础研究基金（lzujbky-2021-ct05）资助。兰州兽医研究所张强、卢曾军研究员，李坤副研究员，兰州大学雷东升教授，西北农林科技大学华进联教授为论文共同通讯作者，兰州大学武山权博士研究生在结构解析方面做出了重要贡献，兰州兽医研究所和西北农林科技大学联合培养博士生黄书伦为论文第一作者。文章链接：https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1013893

华中农业大学彭贵青教授团队揭示冠状病毒劫持宿主CLTC促进双膜囊泡形成新机制

近日，动物科学技术学院、动物医学院彭贵青教授团队研究成果以"Coronavirus Nsp3 Hijacks CLTC to Modulate Autophagosome Nucleation for Promoting DMV Formation and Viral Replication"为题在Advanced Science发表。冠状病毒是一类具有广泛宿主范围的单股正链RNA病毒，不仅威胁人类健康，也严重危害动物健康，造成养殖业重大经济损失；其中猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）等动物冠状病毒可导致动物100%死亡；此外，PDCoV等动物冠状病毒还具有跨物种传播潜力，给公共卫生安全带来严峻挑战。因此，揭示冠状病毒在动物宿主中的复制机制，对保障养殖业健康发展和公共卫生安全具有重要意义。冠状病毒感染细胞后，病毒非结构蛋白nsp3、nsp4等会“劫持”细胞内部分膜结构，将其“改造”成一个病毒复制的坚固“厂房”或“老巢”（双层囊泡DMV），以确保病毒高效扩增并逃逸免疫监视；但其具体调控机制目前尚不清楚。因此，解析DMV形成机理对于理解冠状病毒的致病机制和开发抗病毒广谱性药物至关重要。CLTC参与冠状病毒双层囊泡形成模式图研究团队另辟蹊径，以动物冠状病毒为模型，将荧光蛋白精准标记在DMV关键构建病毒蛋白nsp3上，首次实现真实病毒感染下对DMV形成的实时可视化。利用这一新工具，团队成功鉴定出40个与DMV形成相关的宿主蛋白，其中网格蛋白重链（CLTC）被特异性富集于DMV组装位点，且对多种冠状病毒（包括人冠状病毒229E、PEDV、TGEV、MHV、PDCoV等）的复制至关重要。深入研究表明，病毒感染后，病毒蛋白nsp3可劫持CLTC，利用其在自噬成核阶段产生的自噬前体膜构建DMV。敲除CLTC可显著抑制自噬体成核及DMV形成，进而限制病毒复制。研究不仅成功研发了一个可用于动态观察和药物筛选的DMV研究新平台，更提出了一个全新的抗病毒策略，即通过靶向宿主因子CLTC，阻断病毒“复制工厂”DMV的组装，从而抑制病毒增殖。由于CLTC是多种冠状病毒的共同依赖因子，这一发现为动物冠状病毒的广谱药物研发和抗病育种提供新的靶标。华中农业大学动物科学技术学院、动物医学院博士研究生徐娟为论文第一作者，彭贵青教授为论文通讯作者，华中农业大学为通讯作者单位。该研究得到了国家杰出青年科学基金、湖北省自然科学基金创新群体等项目的资助。论文链接：https://doi.org/10.1002/advs.202521626