王梦旖¹，任静静¹，武正前²，王志艺¹，吴俊煌¹，甘露露¹，李  丹¹，尚佑军^1*，郑海学^1*

（1.中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室，甘肃 兰州  730000；2.古浪县农业产业化服务中心，甘肃 武威   733000）

摘要：制备非洲猪瘟病毒（ASFV）pH108R蛋白的多克隆抗体。首先，通过分析H108R基因的跨膜区（TR）并去除该区域，构建pH108R重组蛋白的原核表达质粒pET-22b-H108RΔTR，并经酶切鉴定验证成功构建此质粒。随后，将质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，通过IPTG诱导表达pH108R蛋白。SDS-PAGE检测显示蛋白以包涵体形式表达，经镍柱亲和层析法纯化后，用于免疫豚鼠制备多克隆抗体。免疫印迹、间接免疫荧光和免疫共沉淀试验结果表明，制备的多克隆抗体能够特异地识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的pH108R蛋白。本研究为深入研究ASFV pH108R蛋白的生物学功能提供了有效的检测工具。

原文链接：非洲猪瘟病毒pH108R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备PDF