戴观丽^1，2，周艳龙²，武正前³，宋大铭²，蔡祎平²，周玉龙^1*，李  丹^2*，郑海学^2*

（1.黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆  163319；2.中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室，甘肃 兰州  730000；3.古浪县农业产业化服务中心，甘肃 武威  733000）

摘要：首先，通过PCR扩增和同源重组技术构建了pET-28a-H124R重组原核表达质粒。经IPTG诱导，pH124R蛋白在大肠杆菌中高效表达，并通过镍柱亲和层析法纯化获得重组蛋白。随后，用pH124R重组蛋白免疫豚鼠，制备了特异性多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光试验（IFA）对其进行检测，结果表明该抗体能够特异性识别ASFV感染细胞中表达的内源pH124R蛋白，且该蛋白主要定位于细胞质病毒工厂区域。本研究成功实现了ASFV pH124R蛋白的原核表达，并制备了可用于Western-blot和IFA试验的特异性多克隆抗体，为深入研究pH124R蛋白的生物学功能提供了重要生物学材料。

附件：非洲猪瘟病毒pH124R蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备