我国自主研发的布鲁氏菌基因缺失标记活疫苗首发上市

5月26日，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所联合中国农业科学院兰州兽医研究所、金宇保灵生物药品有限公司、哈尔滨维科生物技术有限公司、中牧实业有限公司等单位共同研制的布鲁氏菌基因缺失标记活疫苗产品在国内首发上市。该疫苗的应用，将有效降低布鲁氏杆菌病的传染率，助力我国羊产业健康发展，保证人类健康，实现人病兽防。布鲁氏杆菌病简称布病，是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病，其临床特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等。近年来我国人间布病报告病例居高不下，2021年达6.9万例，2022年前三个月继续保持高位，达1.5万例。流行病学研究显示，感染羊种布鲁氏菌的病羊是我国人间病例最主要传染源。疫苗接种可显著降低羊的感染率和发病率，有效阻断畜间和人畜间传播，为控制流行、建立净化畜群创造条件。据哈尔滨兽医所所长步志高介绍，传统布病疫苗无法从技术上区别免疫动物和自然感染动物，严重干扰了流行病监测，妨碍净化群建立和无疫区建设，成为制约疫苗生产应用的关键瓶颈。该标记疫苗与实验室研制的诊断试剂盒配套使用，能够有效区分现地野毒感染和疫苗免疫，彻底解决困扰布病监测、防疫的难点问题，将对我国羊布病的有效防控和净化发挥积极作用，为农业农村部《畜间布鲁氏菌病防控五年行动方案（2022—2026年）》提供重要支撑。据悉，该标记疫苗的研发历时18年，科研人员从实验室到车间、养殖场，从黑龙江到内蒙、甘肃、青海、新疆，历经千辛万苦。疫苗研发过程始终得到了农业农村部、科技部和中国农科院的大力支持。疫苗主创人员胡森研究员在现地开展免疫试验信息来源：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

兽医公共卫生安全与管理团队揭示非洲猪瘟病毒免疫逃逸新策略的分子机制

近日，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所兽医公共卫生安全与管理创新团队研究发现非洲猪瘟病毒多基因家族蛋白MGF360-14L能抑制I型干扰素的产生，并探明了抑制作用分子机制。相关研究成果发表在《细胞和感染微生物学前沿（Frontiers in Cellular and Infection Microbiology）》（IF=5.29）上。先天免疫是宿主抵抗病原微生物入侵的第一道防线，非洲猪瘟病毒编码多种免疫逃逸蛋白，这些蛋白可以通过不同策略逃避宿主的先天性免疫应答，帮助非洲猪瘟病毒入侵机体。MGF360-14L是非洲猪瘟病毒多基因家族蛋白，对干扰素的产生具有明显的抑制作用，是非洲猪瘟病毒免疫逃逸的新策略，但具体作用机制仍不清楚。该研究首先通过双荧光素酶报告基因系统明确了MGF360-14L能够抑制cGAS-STING介导的IFN-β的启动子活性，然后确定了MGF360-14L与干扰素调节因子3（IRF3）存在互作，并通过泛素化途径抑制IRF3的表达。进一步研究表明，MGF360-14L通过招募TRIM21蛋白促进IRF3的泛素化降解，从而抑制I型干扰素的产生。本研究揭示了非洲猪瘟病毒免疫逃逸新策略的分子机制，为非洲猪瘟疫苗研发提供了新的理论依据。图 MGF360-14L抑制IRF3中国农业科学院北京畜牧兽医研究所王洋为文章第一作者，崔帅和鑫婷为文章共同第一作者，郭晓宇、贾红和朱鸿飞为通讯作者。该研究得到国家重点研发项目和云南省重点研发项目的资助。原文链接：https://doi.org/10.3389/fcimb.2021.818969

兰州兽医研究所在动物流感病毒与宿主因子互作机制方面取得重要进展

2022年2月16日，中国农业科学院兰州兽医研究所动物病毒分子生态学创新团队在《公共科学图书馆：病原（PLoS Pathogens）》发表了题为“MicroRNA-200c-targeted Contactin 1 Facilitates the Replication of Influenza A Virus by Accelerating the Degradation of MAVS”的研究论文。该研究揭示了宿主接触蛋白CNTN1在A型流感病毒介导的宿主天然免疫应答中的新功能。A型流感病毒是引起全球流感大流行和季节性流感暴发的人畜共患病原病原，严重威胁公共卫生安全和养禽业。在过去的一个世纪中曾导致四次流感大流行，给人类健康和社会经济带来沉重打击。天然免疫系统是宿主抵抗病原体感染的第一道防线。流感病毒与宿主天然免疫系统的相互作用机制一直是流感病毒领域的研究热点。本团队近些年致力于动物流感病毒与宿主相互作用机制研究，在动物流感病毒感染与宿主天然免疫调控机制等方面取得一系列成果，并先后发表在PLoS Pathogens (2021)、Journal of Virology (2018, 2020)、Veterinary Microbiology (2018, 2019)、Virology (2022)等主流期刊，为动物流感的防控提供多种新思路和潜在新靶点。接触蛋白CNTN1是免疫球蛋白超家族的一员，在神经系统发育和肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。研究人员在前期研究基础上，通过高通量测序筛选到一个与流感病毒复制相关的宿主蛋白CNTN1。研究发现CNTN1可以促进流感病毒复制。其机制为：CNTN1可通过招募去泛素化酶USP25，催化天然免疫重要接头分子MAVS的K63型去泛素化反应，降低MAVS的K63型泛素化水平，促进MAVS通过蛋白酶体途径降解，进而抑制宿主天然免疫反应，促进流感病毒复制。本研究揭示了CNTN1促进流感病毒复制的新功能，阐明了CNTN1抑制流感病毒介导的天然免疫反应的分子机制，拓展了我们对宿主抗病毒天然免疫调控机制的认知。动物病毒分子生态学团队助理研究员徐帅为论文的第一作者，团队首席朱启运研究员为论文的通讯作者。该研究得到了国家重点研发计划（2016YFD0500207，2021YFD1800200）、国家自然科学基金（31802178，32172820，31961133013，31772716）和中国农业科学院科技创新工程（CAAS-ASTIP-JBGS-20210102）等项目资助；同时该研究也得到国家禽流感参考实验室在平台和实验材料方面的大力支持。相关链接：https://journals.plos.org/plospathogens/article?id="10.1371/journal.ppat.1010299

兰州兽医研究所在非洲猪瘟病毒免疫逃逸和蛋白互作调控方面取得系列进展

近日，兰州兽医研究所郑海学研究员领衔的口蹄疫与新发病流行病学创新团队在非洲猪瘟病毒免疫逃逸和蛋白互作调控方面取得系列新进展，相关研究结果分别以 “MGF360-9L is a major virulence factor associated with the African swine fever virus by antagonizing the JAK/STAT signaling pathway”，“Construction, identification and analysis of the interaction network of African swine fever virus MGF360-9L with host proteins”，及“Mechanism of interaction between virus and host is inferred from the changes of gene expression in macrophages infected with African swine fever virus CN/GS/2018 strain”为题目，发表在《mBio》，《Viruses》和《Virology Journal》杂志。上述研究分析并鉴定了非洲猪瘟病毒感染猪肺泡巨噬细胞的差异表达基因，验证了部分差异表达基因的生物学功能。筛选并鉴定了非洲猪瘟病毒编码的免疫抑制基因MGF360-9L，构建并分析了与MGF360-9L相互作用的宿主蛋白调控网络，深入研究了MGF360-9L拮抗天然免疫应答的分子机制。研究发现MGF360-9L蛋白能够降解STAT1和STAT2，拮抗JAK/STAT信号通路，从而抑制I型干扰素的信号转导。缺失MGF360-9L的重组非洲猪瘟病毒株对猪致病力降低，表明MGF360-9L是非洲猪瘟病毒编码的主要毒力基因之一。上述研究结果为深入理解非洲猪瘟病毒与宿主相互作用的生物学机制提供了新的理论基础，为非洲猪瘟疫苗及抗病毒药物的研发提供了新的思路。该研究得到国家重点研发计划（2021YFD1800100; 2021YFD1801300）、甘肃省科技重大专项（20ZD7NA006）、中国农业科学院基本科研业务费（Y2019YJ07-01）以及中国农业科学院兰州兽医研究所“揭榜挂帅”项目（CAAS-ASTIP-JBGS-20210101）等资助。张克山研究员和硕士研究生杨博为《mBio》共同第一作者，郑海学研究员为论文通讯作者；硕士研究生杨博为《Viruses》和《Virology Journal》的第一作者，郑海学研究员和张克山研究生员为论文共同通讯作者。原文链接：《mBio》https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35076286/《Viruses》https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34578385/《Virology Journal》https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34412678/

上海兽医所研究揭示猪塞内卡病毒2AB蛋白抑制细胞自噬促进病毒增殖的分子机制

    近日，中国农业科学院上海兽医研究所童光志研究员领导的猪病毒性繁殖障碍综合症创新团队在A型塞内病毒 (SVA)拮抗宿主自噬蛋白降解机制上取得新进展，发现SVA 2AB蛋白能够通过降解LC3和MARCHF8蛋白抑制宿主自噬和干扰素信号通路促进病毒增殖，相关研究结果以 “2AB protein of Senecavirus A antagonizes selective autophagy and type I interferon production by production by degrading LC3 and MARCHF8”为题发表于《Autophagy》（IF: 16.016） 杂志上。       细胞自噬是真核细胞维持稳态的一种重要的生命活动,是细胞内主要依赖于溶酶体的一种降解途径，将机体不需要的生物大分子包裹形成自噬体，并与溶酶体融合将内容物降解；自噬与许多疾病的发生密切相关，也具有抑制病原体的功能，这一功能常与天然免疫密切相关,最终拮抗病原微生物的感染。       A型塞内病毒 (SVA)是一种新兴感染猪的病毒，在不同的地区和国家暴发，成为一种全球流行的病毒。已有研究报道称SVA感染可诱导自噬。然而，SVA诱导自噬的分子机制及其对自噬的影响尚不清楚。本团队发现在SVA感染早期宿主细胞激活自噬，通过自噬降解病毒3C蛋白以抑制SVA复制。然而，在病毒感染后期，SVA通过自身编码的2AB蛋白抑制自噬蛋白降解拮抗宿主对病毒的抑制作用。进一步研究发现SVA 2AB蛋白泛素化LC3蛋白，并促进LC3蛋白降解，从而抑制自噬过程。此外，研究表明MARCHF8是IFN-I 信号转导的正调节因子。在病毒感染过程中，SVA 2AB蛋白靶向并降解MARCHF8 和MAVS形成的复合体，抑制IFN-I信号通路。该研究不仅系统阐明了SVA抑制自噬和IFN-I信号通路促进病毒增殖的分子机制，同时为抗病毒药物的研制和疫苗的开发提供理论基础。 图：A型塞内病毒2AB蛋白拮抗宿主自噬蛋白降解机制示意图       本研究是在国家自然科学基金和上海市自然科学基金的资助下完成的。中国农业科学院上海兽医研究所硕士研究生孙大格、孔宁副研究员、塔里木大学联合培养硕士研究生董苏洁为论文共同第一作者，中国农业科学院上海兽医研究所童光志研究员和单同领研究员为该论文的共同通讯作者。原文链接：https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/15548627.2021.2015740

研究人员发现冠状病毒TGEV调控抗病毒microRNA的分子机制

　　近日，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室冯力研究员领衔的猪消化道传染病创新团队，在猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）调控抗病毒microRNA的研究中取得新进展，相关研究成果以“Coronavirus transmissible gastroenteritis virus antagonizes the antiviral effect of the microRNA miR-27b via the IRE1 pathway”为题，发表在《中国科学:生命科学（Science China Life Sciences）》上。该研究发现TGEV通过定位于内质网膜上的肌醇依赖内质网至细胞核信号激酶1（IRE1）途径抑制抗冠状病毒microRNA的表达，从而逃避宿主的免疫监视。 　　miRNA是一类由内源基因编码的长度约为18-36个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过与靶标mRNA的3'端非翻译区（3'-UTR）特异性结合，从而引起靶标mRNA分子的降解或翻译抑制，在动植物中参与转录后基因表达调控。尽管研究人员对miRNAs的功能已有一定程度的探索，但这些分子在冠状病毒感染中的作用以及冠状病毒感染后调控miRNAs的分子机制仍不清楚。本研究发现miRNAs中的miR-27b-3p能够发挥广谱抗肠道病毒（猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪轮状病毒（PoRV））的作用，并找到其靶标mRNA-猪细胞因子信号转导抑制因子6（SOCS6）。 　　图1 TGEV拮抗miR-27b抗病毒作用的机制 　　TGEV是一种引起仔猪腹泻的肠道冠状病毒，在哺乳仔猪中引起高发病率和高死亡率。据薛美副研究员介绍，他们发现TGEV感染的细胞和仔猪肠道中miR-27b-3p的表达均明显下调（图1A）。进一步探索其机制，发现TGEV感染后大量病毒蛋白在内质网上合成、修饰和折叠，诱导细胞产生了内质网应激，其中定位于内质网膜上的IRE1编码一种有效的转录因子X盒结合蛋白1（Xbp1s）。Xbp1s抑制miR-27b-3p的转录并最终减少miR-27b-3p的产生（图1B和1C）。 　　TGEV对miR-27b-3p的抑制表达，使其靶标SOCS6大量表达，从而负反馈调节细胞因子信号传导，抑制抗病毒信号传导从而病毒可以在细胞内大量复制（图1）。本研究首次发现冠状病毒TGEV通过IRE1途径抑制具有广谱抗肠道病毒功能的miR-27b-3p的表达，从而逃避宿主的免疫监视，并对宿主造成严重损伤。 　　该研究得到了黑龙江省博士后基金（LBH-Z18207）和国家自然科学基金（31802198）以及中国农业科学院创新工程项目、黑龙江省领军人才团队项目等项目资助。 

哈尔滨兽医所攻克种源性疫病防控难题支撑我国白羽肉鸡新品种高质量培育

　　中国农业科学院哈尔滨兽医研究所历时10余年开展禽白血病等种源性疫病防控净化关键技术研究，为我国白羽肉鸡新品种培育和家禽健康养殖提供了有力的技术支撑。　　种源性疫病防控净化是保障家禽品种培育成功的关键之一。2008年以来，种源性疫病禽白血病大流行，大型祖代鸡场倒闭，给家禽养殖业造成重创，严重威胁我国家禽种源安全。为此，禽白血病被纳入到国家优先防治与净化的疫病。　　哈尔滨兽医所禽免疫抑制病团队近年来创制了禽白血病病毒群特异抗原ELISA检测试剂盒、快速检测胶体金试纸条等一系列自主知识产权的禽白血病检测技术与产品。其中群特异抗原检测胶体金试纸条，使出壳小鸡粪便检测时间由最短4小时缩短为最快20分钟，获国家一类新兽药证书。ELISA检测试剂盒打破国际垄断，被中国动物疫病预防控制中心指定为我国禽白血病检测专用试剂盒，已在全国约三分之二大型育种与养殖企业应用，相关技术被农业农村部列为主推技术。　　前不久，我国自主培育的白羽肉鸡“圣泽901”通过了农业农村部品种审定，哈尔滨兽医所作为参加培育单位，为该品种的培育制定了禽白血病、鸡白痢的净化技术方案，保障了种源的纯净和安全。育种全程使用了自主研制的禽白血病检测产品，检测成本降低了30%以上。下一步，研究所将在家禽疫病防控、抗病品种培育、自育品种安全及健康养殖方面继续作出更多努力，为提高我国种业核心竞争力贡献力量。（通讯员：邓彦莉 ）

小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）检测方法，建立了一种芯片式数字PCR（cdPCR）检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75 /1疫苗株N基因序列设计1对引物，PCR扩增大小为166 bp片段，构建pMDTM18-N标准质粒并优化反应条件，建立了PPRV N基因cdPCR检测方法，并与实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示：当质粒标准品浓度在1.22×（105~102）copies/μL范围时，cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1 000倍，且稳定性好，特异性强；当标准品浓度在1.22×（105~10-3）copies/μL范围时，cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性，但灵敏性比RT-qPCR高100倍；与RT-qPCR 测定结果（13.29±6.74）copies/μL相比，cdPCR的最低检测限更低，约为（0.44±0.14）copies/μL；cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率（25.5%）高于RT-qPCR（17.0%）。结果表明，建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。Development and Application of a Chip Digital PCR Assay for PPRVIn order to establish an accurate、rapid and sensitive method to detect peste des petits ruminants virus（PPRV），a chip digital PCR（cdPCR）assay was developed. A pair of primers was designed based on the N gene sequence of PPRV Nigeria75/1 vaccine strain registered in GenBank. The fragment with the size of 166 bp was amplified by PCR to construct pMDTM18-N standard plasmid，followed by optimization of reaction conditions，then a cdPCR assay for PPRV N gene was established，its sensitivity，repeatability，specificity and clinical sample detection capacity were compared and analyzed with those of RT-qPCR. The results showed that cdPCR was with good stability and specificity，and its sensitivity was 1 000 times higher than that of RT-PCR when the concentration of plasmid standard ranged 1.22×（105~102）copies/μL；cdPCR was with the same specificity as RT-qPCR，but its sensitivity was 100 times higher than that of RT-qPCR when the concentration was 1.22×（105~10-3）copies/μL；the lowest detection limit of cdPCR（0.44±0.14）copies/μL was lower compared to that of RT-qPCR（13.29±6.74）copies/μL；and for 47 clinical samples，the detection rate of PPRV nucleic acid by cdPCR（25.5%）was higher than that by RT-qPCR（17.0%）. In conclusion，the established cdPCR was with good specificity，sensitivity and repeatability，which could support to prevent any early prevalence of PPRV as a rapid and effective diagnostic and quantitative method.全文下载链接：https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDAUTO&filename=ZGDW202112018&uniplatform=NZKPT&v=2vpJqQNi66Hsx9rFNbOw9lXSp6DdAn_4kxzLwL3L4Iwsw1LBwHwJUAFQCpEGvGIW

全球基因I型非洲猪瘟病毒流行与疫苗研究进展

非洲猪瘟病毒已在我国定殖并形成较大污染面，国内样品中发现基因I型非洲猪瘟病毒，提示当前临床中实际流行的病毒种群更加复杂。基因I型毒株从1957年传入葡萄牙后，研究人员就开始对其进行研究。多年来，国外对基因I型毒株的流行分布情况特别是弱毒疫苗进行了大量研究，但国内目前尚无这方面的分析讨论。为此，作者就基因I型非洲猪瘟病毒流行与疫苗研究现状进行综述，以期为我国非洲猪瘟的科学防控提供参考。Global Epidemic and Vaccine Research Status of African Swine Fever Virus Genotype I StrainThe African swine fever virus has been introduced into China and contaminated certain areas. Genotype I strains have been found in domestic pig samples，suggesting that the virus populations actually circulating in clinical samples are more complicated. Research on genotype I strains began after it was introduced to Portugal in 1957. After years of research accumulation，a large number of studies on the prevalence and distribution of genotype I strain，especially the development of live-attenuated vaccines based on genotype I strains，have been largely documented and developed in foreign countries，but there is no description in this regard in China. Therefore，the author reviewed the current status of the African swine fever virus genotype I strains and vaccine research developement，hoping to provide a reference for the scientific prevention and control of African swine fever in China.全文下载链接：https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDAUTO&filename=ZGDW202112015&uniplatform=NZKPT&v=2vpJqQNi66Hby1pq3vTe20KOauu52mR6F-LqVPN6BLcUOMbZmSw5vpffiQkl1Ono

肉羊遗传育种科技创新团队揭示miRNA调控山羊产羔数的作用机制

　　近日，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所肉羊遗传育种科技创新团队利用RNA-seq测序技术整合分析了高、低产云上黑山羊卵巢组织中差异表达microRNA，构建了miRNA-mRNA互作调控网络，并对候选miRNA进行了功能验证，为山羊遗传改良提供了重要参考依据。相关研究结果发表在《生物医学中心基因组学（BMC Genomics）》上。　　产羔数是山羊繁殖力的一个重要指标，主要由排卵率决定。然而，山羊高繁殖力性状在卵泡期的mircroRNA调控机制仍不清楚。研究人员以产羔数具有显著差异的云上黑山羊为对象，基于高通量测序技术，分别从差异表达mRNA和miRNA、miRNA-mRNA调控网络、GO和KEGG功能富集分析等方面筛选出了调控山羊多羔性状相关重要候选基因及其调控元件。随后，研究人员利用荧光定量PCR、双荧光素酶活性检测和CCK-8等技术，揭示了miR-1271通过调控靶基因 TXLNA 表达影响山羊产羔数的分子机制。　　图 差异表达mRNA和miRNA火山图及RT-qPCR验证　　该研究得到中国农业科学院科技创新工程、国家现代农业产业技术体系资助、云南省科技创新人才计划等的支持。博士后刘玉芳为文章第一作者，储明星研究员和洪琼花研究员为共同通讯作者。