布氏杆菌病是一种由布鲁氏菌引起的人兽共患动物源性细菌性传染病，它是世界动物卫生组织（OIE）规定的B类动物疫病，我国也将其列为二类动物疫病之首。该病不仅阻碍我国畜牧业的发展，同时对人体健康产生重大影响，21世纪由于畜间布病的影响，我国人间布病的发病率有所提高，国家适时出台了《畜间布鲁氏菌病防控五年行动方案（2022—2026年）》，确定了到2026年，我国牧场个体阳性率控制在0.4%以下，群体阳性率控制在7%以下的总体目标。为达成目标离不开检测技术的支持，现阶段布病的检测方法较多：如虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）、补体结合试验（CFT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。但虎红平板凝集试验（RBPT）还是应用最广泛的检测手段。

一、布氏杆菌病虎红平板凝集试验

（RBPT）的优势及原理

1、当前布氏杆菌病虎红平板凝集试验（以下简称虎红平板凝集试验）仍然是我国布病诊断使用频率最高、最主要的检测方法，是我国法定的检测方法，在国际贸易中也是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，该检测方法具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查、引种、及疫苗免疫效果评价等。由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验，经简单培训后，养殖户也可自行完成检测。为布病的防控及净化提供了强有力的检测手段。

2、虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性(PH3.6-3.7)带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的lgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是lgG类，因此提高了反应的特异性。

二、试验材料准备

1、由哈药集团生物疫苗有限公司生产的虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清。阴性和阳性血清为冻干品，使用时按标明的毫升数用0.5%苯酚（俗称石炭酸）生理盐水进行稀释备用。

2、采血应规范、自然出清、且勿添加抗凝血剂，被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

3、洁净玻璃板，其上划分成4c㎡小格并做好与家畜相应的标号或者使用凝集试验板。

4、吸管或移液器，适于滴加30μL（0.03mL）液体。移液器的规格最好为5-50μL，确保剂量的准确。

5、准备牙签供搅拌用，确保每个样本都使用单独牙签。

6、称取0.5克苯酚（俗称石炭酸），加入100ml的生理盐水中，配置后高压锅中121℃高压30分钟。

三、操作方法

1、实验前，应将抗原在室温放置30-60min。

2、将玻璃板上各方格标记被检血清号，然后加相应被检血清30μL（0.03mL）。

3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原30μL（0.03mL）。

4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在4分钟内观察结果，确保每个样本血清使用单独的牙签。

5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。

四、结果判定

1、在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。一定注意超过4min没有判定意义。

3、在观察时可将玻璃板或凝集板进行摇动使混合液流动，更利于结果的观察。

4、如下图1号为阴性，2号为阳性。如家畜未接种布病疫苗，则阳性者为感染布氏杆菌病。

五、注意事项

1、血清的质量是影响布病血清学试验结果准确性的重要因素之一，血清最好是新鲜、清亮透明、无溶血、防止细菌污染，并且避免反复冻融。为使检测结果准确最好使血液自然出清，自然出清优于使用离心机。可减少纤维蛋白原与虎红抗原产生非特异性凝集反应。

2、抗原在室温放置30min-60min进行回温，利于抗原与抗体的结合。

3、在早晨喂料前或停食后6小时进行采血，空腹血清出现假阳性少。采集血液样本时不要加抗凝剂，以免影响对检测结果做出正确的判定。

4、本试验温度在室温22±4℃进行结果更加准确，一定温度范围内，温度越高，血清学反应进行的越快。因此，在试验前要注意环境温度是否适合进行本试验。

5、凡是试验中凝集颗粒不规则，大小不匀，片状或絮状，凝集不清澈者，一般为假阳性，否则凝集颗粒规则大小均匀，凝集清澈者为阳性。

6、抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一，一定要采购正规厂家、产品稳定、经国家认可的产品。运输过程中要2-8℃冷链运输，以确保产品质量。

7、对于未操作过该试验的人员，每次进行检测的样本数量不宜超过5个，并且抗原最好统一加到血清旁，最后分别用牙签进行混匀。

哈药“布氏菌病虎红平板”